調節樣本的含水量等因素來優化裂解條件·裂解不充分:增加物理破碎的時間和次數。·檢查洗滌液中是否加入乙醇。·洗脫不充分:建議二次洗脫增加產量或提高洗脫體積。問題3:提取的DNA無法擴增怎么辦?解決思路:· 檢測DNA的濃度:過量的DNA模板也會抑制PCR反應。·樣本DNA稀釋之后可以擴增:樣本中的腐殖酸等抑制物含量高。·確定PCR反應條件是否已優化:退火溫度,時間,引物等等。·非特異條帶:洗脫液中目的DNA的豐度可能比較低上海益啟生物的土壤DNA提取詢價聯系方式。金山區FastDNA Spin Kit For Soil土壤DNA提取代理商
PCR擴增及電泳 PCR擴增使用Identifiler Plus試劑盒,10 μl擴增體系中含4 μl master mix、2 μl primer set、4 μl模板,擴增程序為,95℃,11分鐘;94℃,20 秒,59℃,3分鐘,30個循環;60℃,10分鐘;4℃保存;電泳在ABI 3500XL儀器中進行;電泳上樣體系為,1 μl PCR產物,9 μl甲酰胺,其中已加Liz。 實施例3 以玻璃纖維膜提取土壤尿液DNA 1)DNA提取 刮取含有尿液的表層土壤,烘干,取100-200 mg土壤樣品,加入樣品管中,然后加入400 ul土壤裂解液和20 ul 蛋白酶k,震蕩混勻后,75℃加熱裂解15分鐘;最大轉速離心5分鐘,將上清液轉移至新的樣品管中,加入800 ul結合液,混勻;混合液轉移至裝有玻璃纖維的離心柱中,FastDNA Spin Kit土壤DNA提取哪家好土壤DNA提取是良好的科學儀器。
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8000rpm離心1分鐘,上清DNA溶液轉移至新的離心管中。 2)PCR擴增及電泳 PCR擴增使用Identifiler Plus試劑盒,10 μl擴增體系中含4 μl master mix、2 μl primer set、4 μl模板,擴增程序為,95℃,11分鐘;94℃,20 秒,59℃,3分鐘,30個循環;60℃,10分鐘;4℃保存;電泳在ABI 3500XL儀器中進行;電泳上樣體系為,1 μl PCR產物,9 μl甲酰胺,其中已加Liz。 實施例2 以硅膠膜提取土壤尿液DNA 1)DNA提取 刮取含有尿液的表層土壤,烘干,取100-200 mg土壤樣品,加入樣品管中,然后加入400 ul土壤裂解液和20 ul 蛋白酶k,震蕩混勻后,75℃加熱裂解15分鐘;最大轉速離心5分鐘,將上清液轉移至新的樣品管中,加入800 ul結合液,混勻;混合液轉移至裝有硅膠膜的離心柱中,12000rpm離心1分鐘;倒棄收集管中廢液,加入500 ul漂洗液,12000rpm離心1分鐘;倒棄收集管中廢液,加入500 ul漂洗液,12000rpm離心1分鐘;倒棄收集管中廢液,12000rpm離心3分鐘,將離心柱轉移至新的離心管中,70℃加熱3分鐘;加入20 ul洗脫液,70℃加熱3分鐘;12000rpm離心1分鐘,丟棄離心柱,離心管中液體即為DNA溶液。 2)上海益啟品牌土壤DNA提取規格。
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:沙漠土;Lane 5:陰性對照。圖:提取不同土壤基因組DNA PCR擴增結果。M: 1kb plus DNA ladder;Lane 1/3/5/7: 酶切前;Lane 2/4/6/8: 酶切后;Lane 1&2:有機營養士;Lane 3&4:花壇土;Lane 5&6:鹽堿土;Lane 78&8:沙漠土。圖:提取不同土壤基因組DNA用Apa I酶切結果。PART.03。選擇MP試劑盒的理由。MagBeads FastDNATM Kit for Soil:A260/A280更接近1.8, A260/A230更高, 提取純度高于平均水平,提取效果穩定。DNA收率效果對比—濃度更高金山區FastDNA Spin Kit For Soil土壤DNA提取代理商