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來源: 發(fā)布時間:2022-07-01

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常見檢測細胞: **細胞(MDA-MB-231, MCF-7, HT1080, B16F10)等,用孔徑為8μm的培養(yǎng)小室巨噬細胞、單核細胞 PMN:用孔徑為5μm的培養(yǎng)小室內(nèi)皮細胞(HUVEC)、白血病細胞 K562、骨髓瘤細胞HB124:用孔徑為 3μm或5μm的培養(yǎng)小室 具體操作: 以配合24孔板的8μm PET膜Millicell?懸掛式細胞培養(yǎng)小室(cat#MCEP24H48)為例,實驗周期:3-5天 復蘇代數(shù)靠前的**細胞,在含有10%FBS的培養(yǎng)基中預先培養(yǎng)2-3代,待細胞匯合達到80%左右,饑餓處理18-24小時。 準備鋪膠: a) 4 °C融EMC膠過夜。 b) 將細胞小室、培養(yǎng)板和***頭等于4°C 預冷。益啟生物公司帶您了解細胞轉(zhuǎn)染詳情。金山區(qū)添加劑細胞培養(yǎng)報價

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取上述200μL細胞液加入小室,下室(培養(yǎng)板)加入900L含有10% FBS的培養(yǎng)基。不同規(guī)格的小室和培養(yǎng)板所加的體積不同,具體參考Millicell?產(chǎn)品說明書。37°C孵育24至72小時,依據(jù)**細胞類型而定。孵育結束,小心取出細胞小室,吸掉小室上層培養(yǎng)液,PBS清洗一遍,70%酒精或者4%多聚甲醛固定5min,0.5%結晶紫(2%乙醇或PBS溶解)染色20min,然后進行第8步或者第9步。PBS清洗兩次以去除多余的染料,立即用棉簽擦去濾膜上層的細胞,自然靜置風干。顯微鏡下觀察濾膜下層的細胞,隨機選取不同的視野計數(shù)并算平均值。結晶紫溶解濾膜下層細胞,然后用33%醋酸脫色,將結晶紫完全洗脫下來,洗脫液可在酶標儀上570nm讀取OD值。這種方法可以避免視野下細胞穿透不均勻帶來的誤差。金山區(qū)添加劑細胞培養(yǎng)報價

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