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拭子RNA提取試劑的選擇?拭子樣本的量與提取的核酸量成正比,如果要提高核酸得率,也可通過增加樣本量來實(shí)現(xiàn)。一般先取一根拭子的涮洗液樣本,然后進(jìn)行提取,如結(jié)果不理想可考慮增加樣本量或重新采樣。但如果增加樣本量或重新采樣還不能得到滿意結(jié)果,應(yīng)及時(shí)考慮更換試劑盒。目前國內(nèi)常用的拭子核酸提取試劑有Q、Biog等。根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn),Q和T品牌試劑盒的拭子RNA提取得率(一根口腔拭子在口咽部來回刮擦10次)在0.5-3.5ug。同樣處理的口咽拭子,Biog試劑盒的提取得率在1-4ug,基本上都能滿足下游PCR相關(guān)實(shí)驗(yàn)的要求。細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點(diǎn):提取的RNA,品質(zhì)高,產(chǎn)量多。寧波RNA提取試劑廠家供應(yīng)
總RNA提取試劑是廣譜型總RNA提取試劑。實(shí)驗(yàn)操作快速方便,顏色鮮明,便于分層。本試劑適用范圍普遍,可以從動(dòng)物組織、植物材料、各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等樣品中提取總RNA。該方法對少量的組織(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(>107)均有較好的分離效果。樣品在總RNA提取試劑中被充分裂解的同時(shí)能夠較大限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后,溶液會(huì)分成三層:上層無色水相、中間層和下層紅色有機(jī)相,RNA分布在上清層中。收集上清層后,經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好,無蛋白和DNA污染,可用于各種分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn),如RT-PCR、Real-timeRT-PCR、Northernblot、DotBlot、體外翻譯等無錫正規(guī)RNA提取試劑根據(jù)它們在不同的PH值和不同極性溶劑的溶解度不同而使得分開。
總RNA提取試劑是一種快速從組織細(xì)胞中提取總RNA的單相試劑。在樣品裂解過程中TRIzol能夠壓制RNA酶活性保持RNA完整性;加入氯仿后離心,RNA相將與DNA和蛋白質(zhì)分離,隨后用異丙醇沉淀RNA。如果需要還可以繼續(xù)提取DNA和蛋白質(zhì)。純化的總RNA可用于RT-PCR、NorthernBlot、RNA酶保護(hù)、Poly(A)mRNA純化、體外翻譯等實(shí)驗(yàn)。是一種快速從組織細(xì)胞中提取總RNA的單相試劑。在樣品裂解過程中TRIzol能夠壓制RNA酶活性保持RNA完整性;加入氯仿后離心,RNA相將與DNA和蛋白質(zhì)分離,隨后用異丙醇沉淀RNA。如果需要還可以繼續(xù)提取DNA和蛋白質(zhì)。純化的總RNA可用于RT-PCR、NorthernBlot、RNA酶保護(hù)、Poly(A)mRNA純化、體外翻譯等實(shí)驗(yàn)
RNA的提取:眾所周知,Trizol是一種RNA提取試劑,內(nèi)含異硫氰酸胍和酚等物質(zhì),能迅速破碎細(xì)胞和溶解細(xì)胞中的其他成分,壓制細(xì)胞釋放出核酸酶,維持細(xì)胞中RNA的穩(wěn)定性,我們可以在反應(yīng)物中加入Trizol后搖勻,在加入氯仿離心,這樣的話我們的RNA就進(jìn)入了水相中,再用異丙醇沉淀水相中的RNA,即可達(dá)到提取總RNA的目的了。首先我們需要稱取一定量的預(yù)處理好的廢酵母配10%左右的酵母溶液,在一定溫度下,加入一定濃度的氯化鈉,之后加入NaOH溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH,攪拌抽提一定時(shí)間后,離心分離上清液,調(diào)節(jié)pH至等電點(diǎn),經(jīng)酒精沉淀獲得核糖核酸,用水定容至100mL取1m適當(dāng)稀釋,調(diào)pH7.0,這樣的話RNA就出現(xiàn)了,分別測定吸光值A(chǔ)260和A280并計(jì)算A260/A280,就可以測定RNA的提取率了。當(dāng)然啦,我們還可以進(jìn)行深入研究,如測定Nacl的濃度,PH的大小,以及抽提時(shí)間對RNA提取率的影響啦。以及參與RNAi作用的miRNA與siRNA等,可調(diào)節(jié)基因表達(dá)。
RNA提取:預(yù)備工作(1)塑料制品:盡量使用一次性無菌塑料制品。已標(biāo)明RNase-free的塑料制品,如沒有開封使用過,通常不必再處理。處理的步驟如下:O在玻璃燒杯中注入去離子水,加入DEPC使其終濃度為0.05%~0.1%(DEPC-H2O)。(DEPC二乙基焦碳酸酯為活性很強(qiáng)的劇毒物,須在通風(fēng)櫥中小心使用)O將待處理的塑料制品放入一個(gè)可以高溫滅菌的容器中,注入DEPC-H2O,使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中,在通風(fēng)柜中37℃或室溫下處理過夜。O將DEPC-H2O小心倒入廢液瓶中,將裝有DEPC-H2O處理過的塑料制品的容器以鋁箔封口,高溫高壓蒸汽滅菌至少30分鐘。O滅菌塑料制品烘烤干燥,置潔凈處備用。(2)玻璃和金屬物品250℃烘烤3小時(shí)以上。研缽150度烘烤4小時(shí),離心管、吸頭用DEPC處理。廈門武漢RNA提取試劑
RNA提取試劑注意事項(xiàng):耐高溫器物可150℃烘烤4小時(shí)以去除RNA酶。寧波RNA提取試劑廠家供應(yīng)
RNA提取試劑的選擇:選擇合適的提取試劑是較重要的一步。好的提取試劑在確保成功的同時(shí),操作方便且經(jīng)濟(jì)實(shí)用。對于動(dòng)物組織、簡單的植物材料、各種微生物、培養(yǎng)細(xì)胞的totalRNA提取,Takara公司的RNAisoPlus具有諸多的成功案例。隨著2013年7月柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市,進(jìn)一步豐富了TakaraRNA提取的產(chǎn)品線。該產(chǎn)品采用了獨(dú)特的細(xì)胞裂解系統(tǒng),無需苯酚氯仿抽提等步驟,簡單快捷。組織或細(xì)胞裂解后,提取操作光需20分鐘便可完成~寧波RNA提取試劑廠家供應(yīng)