免疫組化的顯色系統(tǒng)

免疫組化的顯色系統(tǒng)是將抗原-抗體反應(yīng)轉(zhuǎn)化為可見(jiàn)信號(hào)的關(guān)鍵步驟。常用的免疫組化顯色系統(tǒng)有DAB（3,3'-二氨基聯(lián)苯胺）和AEC（3-氨基-9-乙基咔唑）。DAB顯色產(chǎn)生棕色沉淀，適用于光學(xué)顯微鏡觀察。AEC顯色產(chǎn)生紅色沉淀，適用于光學(xué)顯微鏡觀察，但不適合長(zhǎng)期保存。此外，還有熒光顯色系統(tǒng)，如FITC（異硫氰酸熒光素）和TRITC（四甲基羅丹明異硫氰酸酯），適用于熒光顯微鏡觀察。選擇合適的顯色系統(tǒng)需要考慮實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜋z測(cè)設(shè)備。 病理免疫組化多少錢(qián)？浙江靠譜免疫組化實(shí)驗(yàn)

免疫組化染色呈陰性結(jié)果的原因有哪些？

1、抗體濃度和質(zhì)量問(wèn)題以及抗體來(lái)源選擇錯(cuò)誤。不是抗體濃度越高就越易出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，抗原抗體反應(yīng)有前帶和后帶效應(yīng)，必須摸索比較好濃度。

2、抗原修復(fù)不全，對(duì)于甲醛固定的組織必須用充分抗原修復(fù)來(lái)打開(kāi)抗原表位，以利于與抗體結(jié)合；建議微波修復(fù)用高火4次*6min試試。有人做過(guò)實(shí)驗(yàn)，這是比較好的時(shí)間和次數(shù)。若不行，還可高壓修復(fù)。

3、組織切片本身這種抗原含量低。

4、血清封閉時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。

5、DAB孵育時(shí)間過(guò)短。

6、細(xì)胞通透不全，抗體未能充分進(jìn)入胞內(nèi)參與反應(yīng)。

7、開(kāi)始做免疫組化，建議一定要首先做個(gè)陽(yáng)性對(duì)照片，排除抗體等問(wèn)題。 江蘇病理免疫組化怎么選擇病理報(bào)告中的免疫組化到底有什么作用?

免疫組化實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)總結(jié)：

?本實(shí)驗(yàn)室所用切片一般是石蠟切片。

?烘片：使蠟片水分蒸發(fā)，石蠟軟化，組織切片牢固貼在玻片上；烘片至跟烘片前透明度有差異。

?抗原修復(fù)時(shí)，使片子始終浸沒(méi)在修復(fù)液中，液體不能干。

?一抗孵育在37度培養(yǎng)箱，濕盒放置1h，省時(shí)間和結(jié)合效果好，不要超過(guò)1h，容易過(guò)染。

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?二抗使用：兩個(gè)二抗放大信號(hào)或一個(gè)二抗；若抗體信號(hào)強(qiáng)，可不用放大信號(hào)，盡量增大信噪比。

?10XDAB在常溫溶解，盡可能現(xiàn)用現(xiàn)配，放于4度儲(chǔ)存時(shí)間久了效果不佳。

?復(fù)水和脫水時(shí)所用的梯度酒精不可混用，要區(qū)分開(kāi)。

?加抗體和顯色液時(shí)，都要將片子甩干，在半干半濕的狀態(tài)下再加，不然容易造成溶液的二次稀釋。

?整個(gè)操作過(guò)程中在顯色之前，一定不能干片。

確定來(lái)源不明的轉(zhuǎn)移瘤的原發(fā)部位，臨床上免疫組化也可以進(jìn)行操作。對(duì)于來(lái)源不明的轉(zhuǎn)移瘤，用免疫組化技術(shù)有助于確定惡性cancer的組織學(xué)來(lái)源，進(jìn)一步確定原發(fā)部位。如角蛋白抗體(CK20)在胃腸道cancer、膽管cancer、胰腺cancer中陽(yáng)性，而在肺cancer、乳腺cancer、腎cancer中陰性;Tg陽(yáng)性可考慮甲狀腺轉(zhuǎn)移;波形蛋白(Vimentin)陽(yáng)性支持肉瘤的診斷;前列腺特異性抗原(PSA)陽(yáng)性可考慮前列腺轉(zhuǎn)移;甲狀腺球蛋白陽(yáng)性可考慮甲狀腺濾泡細(xì)胞cancer;肌動(dòng)蛋白(Actin)、肌球蛋白(Myosin)、結(jié)蛋白(Desmin)、肌紅蛋白(Myoglobin)陽(yáng)性可考慮橫紋肌肉瘤;S-100蛋白陽(yáng)性支持黑色素瘤的診斷;等等這些都為cancer的醫(yī)療及預(yù)后提供了依據(jù)。如何做好免疫組化實(shí)驗(yàn)？

關(guān)于免疫組化的封閉：用和二抗來(lái)源一致的血清在保濕盒中于37℃孵育15~30min，然后甩去封閉用血清，勿洗；注意：封閉時(shí)間根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整；封閉液一般選用5%BSA或與二抗來(lái)源一致的血清，切記是BSA，不是PBS.很多論壇寫(xiě)的是PBS,太坑了。①使用血清好還是BSA好？答：***是待檢樣本會(huì)非特異性的和蛋白結(jié)合，從而導(dǎo)致背景過(guò)高，因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結(jié)合，從這點(diǎn)看，BSA和血清沒(méi)有明顯區(qū)別。第二是待檢樣本中可能會(huì)有Fc受體，可以和抗體恒定區(qū)結(jié)合，與抗體特異性無(wú)關(guān)，封閉血清中有抗體，因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結(jié)合。BSA則無(wú)法封閉Fc受體。免疫組化的那些小知識(shí)，都在這里！浙江免疫組化多少錢(qián)

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免疫組化的應(yīng)用領(lǐng)域

免疫組化在生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中有著廣泛的應(yīng)用。在**學(xué)中，免疫組化通常被用于**標(biāo)志物的檢測(cè)，幫助確定**的類型、分級(jí)和預(yù)后。例如，免疫組化通過(guò)檢測(cè)ER、PR和HER2的表達(dá)，可以指導(dǎo)乳腺*的治療方案。在神經(jīng)科學(xué)中，免疫組化用于研究神經(jīng)元的分布和功能。在免疫學(xué)中，免疫組化可以用于檢測(cè)炎癥細(xì)胞和免疫細(xì)胞在組織中的分布和水平。此外，免疫組化實(shí)驗(yàn)技術(shù)還被廣泛應(yīng)用于發(fā)育生物學(xué)、病理學(xué)和藥物研發(fā)等領(lǐng)域。 浙江靠譜免疫組化實(shí)驗(yàn)